کیت انداره گیری توتال پروتئین BCA

کیت اندازه‌گیری توتال پروتئین BCA پارس توس: روشی دقیق و قابل اعتماد برای تعیین غلظت پروتئین

تعیین دقیق غلظت پروتئین در محلول، یک گام اساسی و بسیار مهم در طیف وسیعی از آزمایش‌های بیوشیمیایی و بیولوژی مولکولی است. از آماده‌سازی نمونه برای الکتروفورز و وسترن بلات گرفته تا خالص‌سازی آنزیم‌ها و تعیین غلظت آنتی‌بادی‌ها، اطلاع از میزان پروتئین برای کنترل کیفیت، استانداردسازی و حصول نتایج قابل اعتماد ضروری است. در میان روش‌های مختلف کوانتیفیکاسیون پروتئین، آزمون BCA (Bicinchoninic Acid) به دلیل سادگی، حساسیت بالا، پایداری رنگ تولید شده و سازگاری با بسیاری از مواد شوینده، به یکی از پرکاربردترین روش‌ها تبدیل شده است. "کیت اندازه‌گیری توتال پروتئین BCA پارس توس" یک راه حل آسان و با دقت بالا برای این منظور فراهم می‌کند.

اساس کار کیت اندازه‌گیری پروتئین BCA: واکنش دو مرحله‌ای

"کیت سنجش پروتئین BCA" بر پایه یک واکنش کالریمتریک (colorimetric) دو مرحله‌ای استوار است که منجر به تولید یک محصول رنگی بنفش می‌شود که شدت آن متناسب با غلظت پروتئین است:

1. احیای مس (Cu2+ به Cu+): "این کیت سنجش پروتئین از نمک مس (Cu2+) استفاده می‌کند که توسط پروتئین در شرایط قلیایی به Cu+ احیا می‌شود." این مرحله، که به واکنش بیوره (Biuret reaction) نیز معروف است، شامل کمپلکس شدن یون‌های مس دو ظرفیتی (Cu2+) با پیوندهای پپتیدی پروتئین‌ها در محیط قلیایی است. سپس، پروتئین‌ها به عنوان عوامل احیاکننده عمل کرده و یون‌های مس دو ظرفیتی را به یون‌های مس تک ظرفیتی (Cu+) احیا می‌کنند. تعداد یون‌های مس احیا شده متناسب با تعداد پیوندهای پپتیدی و در نتیجه غلظت پروتئین در نمونه است.

2. تولید رنگ بنفش توسط BCA: "حضور معرف (BCA) Bicinchoninic acid در محیط باعث می‌شود مولکول مس احیا شده (Cu+) کمپلکس بنفش رنگی را با یک باند با جذب بسیار قوی در 562nm ایجاد کند." مولکول BCA با یون‌های Cu+ کمپلکس تشکیل می‌دهد و یک محصول رنگی پایدار بنفش تولید می‌کند. شدت رنگ این کمپلکس بنفش با استفاده از یک اسپکتروفتومتر در طول موج 562 نانومتر اندازه‌گیری می‌شود. "شدت رنگ کمپلکس متناسب با میزان پروتئین موجود در نمونه است." با استفاده از یک منحنی استاندارد که با غلظت‌های مشخصی از یک پروتئین استاندارد (مانند BSA) تهیه می‌شود، می‌توان غلظت پروتئین‌های ناشناخته را تعیین کرد.

اجزای کیت اندازه‌گیری توتال پروتئین BCA پارس توس

کیت BCA پارس توس شامل اجزای ضروری برای انجام سنجش پروتئین است:

• BCA Reagent: معرف اصلی Bicinchoninic acid که با یون‌های Cu+ کمپلکس رنگی ایجاد می‌کند.

• Copper Reagent: منبع نمک مس (Cu2+) که توسط پروتئین احیا می‌شود.

• BSA Standard: آلبومین سرم گاوی (Bovine Serum Albumin) با غلظت مشخص و خلوص بالا است که به عنوان استاندارد پروتئین برای رسم منحنی کالیبراسیون و تعیین غلظت پروتئین‌های ناشناخته استفاده می‌شود.

ویژگی‌ها و مزایای کیت اندازه‌گیری توتال پروتئین BCA پارس توس

"کیت اندازه‌گیری توتال پروتئین BCA پارس توس" به دلیل ویژگی‌های برجسته خود، یک انتخاب عالی برای آزمایشگاه‌ها است:

• روش آسان و با دقت بالا: پروتکل کاربری این کیت ساده است و نتایجی با دقت بالا ارائه می‌دهد که برای کاربردهای تحقیقاتی و تشخیصی قابل اعتماد است.

• محدوده اندازه‌گیری گسترده: "این محصول برای اندازه‌گیری غلظت پروتئین در محدوده 5 تا 800 میکروگرم در میلی‌لیتر مناسب است." این گستره وسیع، آن را برای نمونه‌هایی با غلظت‌های مختلف، از رقیق تا نسبتاً غلیظ، کاربردی می‌سازد.

• تنوع کمتر Protein-to-Protein: یکی از مزایای مهم BCA نسبت به روش‌های دیگر (مانند برادفورد) این است که حساسیت آن به تفاوت‌های ساختاری بین پروتئین‌ها (تنوع پروتئین به پروتئین) کمتر است. این بدان معناست که نتایج به دست آمده از این کیت، نمایانگر دقیق‌تری از غلظت کل پروتئین در یک مخلوط پیچیده است، فارغ از نوع پروتئین‌ها.

• کمتر تحت تأثیر قرار گرفتن توسط مواد شوینده یونی و غیر یونی: بسیاری از پروتکل‌های استخراج و خالص‌سازی پروتئین از مواد شوینده (detergents) مانند SDS، Triton X-100 یا NP-40 استفاده می‌کنند. این مواد می‌توانند با برخی روش‌های اندازه‌گیری پروتئین تداخل ایجاد کنند. مزیت BCA این است که "کمتر تحت تأثیر قرار گرفتن توسط مواد شوینده یونی و غیر یونی" است، که این ویژگی آن را برای اندازه‌گیری پروتئین در نمونه‌های بیولوژیکی پیچیده و لیزات سلولی بسیار مناسب می‌سازد.

• تشخیص میزان حداقل 5μg/ml با پروتکل پیشرفته و دقت بالا: حساسیت بالای کیت امکان تشخیص پروتئین‌ها حتی در غلظت‌های بسیار پایین (تا 5 میکروگرم بر میلی‌لیتر) را فراهم می‌کند، که برای نمونه‌های کمیاب یا رقیق بسیار مفید است.

بسته‌بندی و نگهداری

"این محصول در حجم 50 و 100 میلی‌لیتر بسته‌بندی شده است که شما می‌توانید حجم 100 میلی‌لیتر را با قیمت مناسب‌تر تهیه فرمایید." ارائه دو حجم مختلف، امکان انتخاب بر اساس نیاز و بودجه آزمایشگاه را فراهم می‌کند.

"⚠︎ نکته: این محصول دارای یک بخش فریزری (BSA استاندارد) و یک بخش یخچالی می‌باشد." این شرط نگهداری حیاتی است:

• BSA استاندارد: معمولاً در فریزر 20- درجه سانتی‌گراد نگهداری می‌شود تا پایداری و فعالیت آن حفظ شود.

• سایر معرف‌ها (BCA Reagent و Copper Reagent): معمولاً در یخچال (حدود 4 درجه سانتی‌گراد) نگهداری می‌شوند. رعایت دقیق این شرایط نگهداری برای حفظ کیفیت و طول عمر کیت ضروری است.

نکات مهم در استفاده از کیت

• عدم وجود مواد احیاکننده در نمونه: "نمونه پروتئینی باید عاری از هر گونه مواد احیاکننده باشد." مواد احیاکننده (مانند DTT یا بتا-مرکاپتواتانول) می‌توانند یون‌های مس (Cu2+) را به Cu+ احیا کنند، حتی در غیاب پروتئین. این امر منجر به نتایج کاذب و بیش از حد واقعی می‌شود. بنابراین، نمونه‌ها باید از این مواد پاکسازی شوند یا از روش‌های جایگزین برای اندازه‌گیری پروتئین در حضور این مواد استفاده شود.

• انتخاب بافر مناسب: بافر نمونه و بافر استاندارد باید تا حد امکان یکسان باشند تا تداخل بافری به حداقل برسد.

• انکوباسیون و اندازه‌گیری: رعایت دقیق زمان و دمای انکوباسیون (معمولاً 37 درجه سانتی‌گراد برای 30 دقیقه یا دمای اتاق برای زمان طولانی‌تر) برای حصول حداکثر رنگ و پایداری آن ضروری است. اندازه‌گیری جذب در طول موج 562 نانومتر باید با استفاده از یک اسپکتروفتومتر دقیق انجام شود.

نتیجه‌گیری

"کیت اندازه‌گیری توتال پروتئین BCA پارس توس" یک ابزار قدرتمند، دقیق و کاربردی برای تعیین غلظت پروتئین در محلول‌های بیولوژیکی است. با تکیه بر اصول واکنش بیوره و کمپلکس شدن با Bicinchoninic acid، این کیت نتایج قابل اعتماد و حساسی را در محدوده‌ای وسیع از غلظت‌ها ارائه می‌دهد. مزایای آن شامل عدم تداخل زیاد با مواد شوینده و تنوع کمتر Protein-to-Protein، آن را به انتخابی ایده‌آل برای آزمایشگاه‌های تحقیقاتی، تشخیص طبی و صنایع بیوتکنولوژی تبدیل می‌کند. با رعایت دقیق دستورالعمل‌های نگهداری و استفاده، این کیت می‌تواند به طور موثری به پیشبرد پروژه‌های علمی کمک شایانی کند.