کیت سوبسترا کمی لومینسانس ECL

کیت سوبسترا کمی لومینسانس (ECL) پارس توس: انقلابی در تشخیص پروتئین‌ها در وسترن بلات

در دنیای بیولوژی مولکولی، تکنیک وسترن بلات (Western Blot) ابزاری قدرتمند و پرکاربرد برای تشخیص، شناسایی و کمّی‌سازی پروتئین‌های خاص در یک مخلوط پیچیده است. این روش با تفکیک پروتئین‌ها بر اساس وزن مولکولی، انتقال آن‌ها به یک غشا، و سپس شناسایی با استفاده از آنتی‌بادی‌های اختصاصی، اطلاعات ارزشمندی را فراهم می‌کند. مرحله نهایی و حیاتی در وسترن بلات، مرحله تشخیص (Detection) است که سیگنال حضور پروتئین هدف را قابل مشاهده می‌سازد. در این میان، روش‌های مبتنی بر کمی لومینسانس (Chemiluminescence)، به دلیل حساسیت فوق‌العاده بالا و دامنه دینامیکی وسیع، به استاندارد طلایی در آزمایشگاه‌ها تبدیل شده‌اند. "کیت سوبسترا کمی لومینسانس (ECL) پارس توس" یک محصول با کیفیت است که بر پایه این فناوری عمل می‌کند و نتایج دقیق و واضحی را برای محققان فراهم می‌آورد.

کمی لومینسانس (ECL) چیست و چگونه کار می‌کند؟

کمی لومینسانس (Chemiluminescence) فرآیند تولید نور در نتیجه یک واکنش شیمیایی است، بدون اینکه حرارتی قابل توجه تولید شود. در سیستم‌های ECL، این نور به عنوان یک سیگنال قوی برای شناسایی پروتئین‌های هدف استفاده می‌شود. "کیت ECL پارس توس بر پایه سیستم دو جزئی و متشکل از دو محلول A و محلول B است." این دو محلول حاوی سوبستراها و تقویت‌کننده‌های لازم برای تولید نور هستند.

مکانیسم عمل:

1. آنزیم نشان‌دار: در وسترن بلات، آنتی‌بادی ثانویه (که به پروتئین هدف متصل می‌شود) معمولاً با یک آنزیم مانند پراکسیداز ترب کوهی (Horseradish Peroxidase - HRP) کونژوگه شده است.

2. واکنش شیمیایی: "در حضور پراکسیداز، معرف، نور کمی لومینسنت ساطع می‌کند." این معرف (سوبسترا) معمولاً شامل لومینول (Luminol) و یک تقویت‌کننده (enhancer) است. HRP در حضور پراکسید هیدروژن (به عنوان سوبسترای اصلی HRP) و لومینول، یک سری واکنش‌های شیمیایی پیچیده را کاتالیز می‌کند.

3. تولید نور: در نتیجه این واکنش‌ها، لومینول به یک حالت برانگیخته تبدیل می‌شود. هنگامی که لومینول از حالت برانگیخته به حالت پایه بازمی‌گردد، انرژی اضافی خود را به شکل فوتون‌های نور آزاد می‌کند. این نور ساطع شده، سیگنال کمی لومینسانس است.

4. تقویت‌کننده: تقویت‌کننده (enhancer) موجود در کیت، شدت و مدت زمان سیگنال نور ساطع شده را به طور چشمگیری افزایش می‌دهد و حساسیت تشخیص را بهبود می‌بخشد.

"کمیت نور ساطع شده حاصله" مستقیماً متناسب با مقدار آنزیم HRP متصل شده به آنتی‌بادی و در نهایت، متناسب با مقدار پروتئین هدف در نمونه است.

ابزارهای تشخیص نور کمی لومینسانس

برای اندازه‌گیری نور ساطع شده توسط کیت ECL، ابزارهای مختلفی مورد استفاده قرار می‌گیرند:

• فیلم Autoradiograph (فیلم اشعه ایکس): این روش سنتی، شامل قرار دادن غشای حاوی پروتئین‌های باند شده و واکنش داده شده با سوبسترای ECL، در تماس با یک فیلم حساس به نور (فیلم اشعه ایکس) در یک اتاق تاریک است. نور ساطع شده از نقاط دارای پروتئین هدف، فیلم را تحت تأثیر قرار داده و پس از ظهور فیلم، باندهای پروتئینی به صورت تاریک روی فیلم قابل مشاهده می‌شوند.

• دوربین CCD (Charge-Coupled Device): سیستم‌های تشخیص مبتنی بر دوربین CCD (مانند ImageQuant™ یا Chemiluminescence Imagers) از حسگرهای نوری بسیار حساس برای ثبت سیگنال‌های نوری ساطع شده از غشا استفاده می‌کنند. این روش سریع‌تر، حساس‌تر و دارای دامنه دینامیکی گسترده‌تری نسبت به فیلم است و امکان کمّی‌سازی دقیق‌تر را فراهم می‌کند.

• دستگاه Chemiluminescence Reader: این دستگاه‌ها، به ویژه برای اندازه‌گیری سیگنال‌های کمی لومینسانس در پلیت‌های میکروتیتر (برای کاربردهای ELISA مبتنی بر کمی لومینسانس) یا در مقیاس‌های کوچکتر، طراحی شده‌اند و امکان خوانش سریع و دقیق سیگنال را فراهم می‌کنند.

کاربرد اصلی کیت سوبسترا کمی لومینسانس پارس توس

"Chemiluminescence Detection kit برای روش‌های وسترن بلات بر پایه HRP توصیه می‌شود." این کیت به طور خاص برای تشخیص پروتئین‌ها در وسترن بلات طراحی شده است، جایی که آنتی‌بادی ثانویه با HRP کونژوگه شده و سیگنال کمی لومینسانس را تولید می‌کند.

"در روش ایمونوبلات (ImmunoBlot)، این کیت عملکرد تشخیصی واضحی را بر روی PVDF و غشای نیتروسلولزی ارائه می‌دهد." هر دو غشای پلی‌وینیلیدین دی‌فلوراید (PVDF) و نیتروسلولز (Nitrocellulose) از غشاهای رایج در وسترن بلات هستند که پروتئین‌ها پس از الکتروفورز به آن‌ها منتقل می‌شوند. سازگاری کیت با هر دو نوع غشا، انعطاف‌پذیری بالایی را برای کاربران فراهم می‌کند.

ویژگی‌های برجسته کیت سوبسترا کمی لومینسانس پارس توس

• حساسیت بالا: "دارای حساسیت بیشتر نسبت به DAB و Alpha-naphtol." این کیت به دلیل فناوری کمی لومینسانس، قادر به تشخیص مقادیر بسیار کم پروتئین (در حد پیکوگرم یا فمتوگرم) است. این حساسیت بالا برای تشخیص پروتئین‌های کم‌بیان یا زمانی که مقدار نمونه محدود است، حیاتی است. در مقایسه با روش‌های رنگ‌سنجی مانند DAB (Diaminobenzidine) یا Alpha-naphthol که محصول رنگی نامحلول تولید می‌کنند، ECL سیگنال تقویت‌شده‌ای از نور را فراهم می‌کند.

• پروتکل ساده و قابل تکرار: استفاده از سیستم دو جزئی، کار با کیت را ساده می‌کند و نتایج قابل تکراری را فراهم می‌آورد.

• مناسب برای وسترن بلات و دات بلات: علاوه بر وسترن بلات (که پروتئین‌ها تفکیک می‌شوند)، این کیت برای دات بلات (Dot Blot) نیز مناسب است. در دات بلات، نمونه‌های پروتئینی مستقیماً و بدون تفکیک الکتروفورتیک روی غشا قرار می‌گیرند و سپس با آنتی‌بادی‌ها و سوبسترای ECL برای تشخیص واکنش می‌دهند.

• کمی‌سازی دقیق: با استفاده از دوربین‌های CCD و نرم‌افزارهای تحلیلی، می‌توان شدت سیگنال نور را کمّی‌سازی کرده و به طور دقیق میزان پروتئین هدف را اندازه‌گیری کرد.

بسته‌بندی و نگهداری

"این محصول در حجم 50 میلی‌لیتر و 100 میلی‌لیتر بسته‌بندی شده است که شما می‌توانید حجم 100 میلی‌لیتر را با قیمت مناسب‌تری تهیه فرمایید." این گزینه‌ها امکان انتخاب بر اساس میزان مصرف و صرفه‌جویی اقتصادی را فراهم می‌کند.

"⚠︎ نکته: این محصول باید در یخچال 4-8 درجه سانتی‌گراد نگهداری شود." "Chemiluminescence Detection kit به نور حساس است و باید از نور خورشید یا اشعه ماوراء بنفش محافظت گردد." حساسیت به نور یک ویژگی مهم برای سوبستراهای کمی لومینسانس است. بنابراین، بسته‌بندی باید در تاریکی نگهداری شود و در حین کار نیز از قرار گرفتن طولانی‌مدت در معرض نور مستقیم خودداری شود. رعایت این شرایط نگهداری برای حفظ پایداری و کارایی کیت برای مدت طولانی (معمولاً تا زمان انقضا) ضروری است.

نکات مهم در استفاده از کیت ECL

• آماده‌سازی بافرها: اطمینان از خلوص و تازگی بافرهای مورد استفاده در وسترن بلات، به ویژه بافرهای شستشو، برای به حداقل رساندن نویز پس‌زمینه ضروری است.

• کیفیت آنتی‌بادی‌ها: کیفیت و اختصاصیت آنتی‌بادی‌های اولیه و ثانویه تأثیر مستقیمی بر نتایج تشخیص با ECL دارد.

• بهینه‌سازی شرایط: غلظت آنتی‌بادی‌ها و زمان انکوباسیون با سوبسترای ECL باید برای هر آزمایش بهینه شود تا بهترین نسبت سیگنال به نویز حاصل شود.

• پاکیزگی: هرگونه آلودگی با HRP یا سوبسترا می‌تواند منجر به سیگنال‌های کاذب شود. بنابراین، رعایت اصول پاکیزگی در آزمایشگاه بسیار مهم است.

نتیجه‌گیری

"کیت سوبسترا کمی لومینسانس (ECL) پارس توس" یک ابزار ضروری و کارآمد برای تشخیص پروتئین‌ها در تکنیک‌های وسترن بلات و دات بلات است. با بهره‌گیری از قدرت فناوری کمی لومینسانس و حساسیت فوق‌العاده بالا، این کیت به محققان امکان می‌دهد تا پروتئین‌های هدف خود را حتی در مقادیر بسیار کم، با دقت و وضوح بالا شناسایی و کمّی‌سازی کنند. سازگاری با انواع غشاها، عملکرد تشخیصی واضح و گزینه‌های بسته‌بندی متنوع، این محصول را به یک انتخاب عالی برای آزمایشگاه‌های بیولوژی مولکولی و بیوشیمی تبدیل می‌کند. با رعایت دقیق دستورالعمل‌های نگهداری و استفاده، کیت ECL پارس توس می‌تواند نتایج قابل اعتماد و تکرارپذیری را برای پیشبرد تحقیقات علمی فراهم آورد.