کیت استخراج RNA گیاهان

کیت استخراج RNA گیاهان پارس توس (Plant RNA Extraction Kit): جداسازی Total RNA با کیفیت بالا از نمونه‌های گیاهی

RNA، به ویژه RNA کل (Total RNA)، یک مولکول حیاتی در بیولوژی مولکولی است که اطلاعات ژنتیکی لازم برای سنتز پروتئین‌ها را حمل می‌کند و نقش‌های تنظیمی متعددی دارد. استخراج RNA با کیفیت بالا و عاری از آلایندگی، اولین و مهم‌ترین گام برای بسیاری از مطالعات بیان ژن، از جمله Real-Time RT-PCR (RT-qPCR)، آنالیز Northern blot، ساخت کتابخانه‌های cDNA، RNA-Seq و تشخیص پاتوژن‌های گیاهی است. "کیت استخراج RNA گیاهان پارس توس" (Plant RNA Extraction Kit) یک راه حل کارآمد و مطمئن را برای جداسازی Total RNA خالص از انواع مختلف نمونه‌های گیاهی ارائه می‌دهد. این کیت با استفاده از یک روش ستونی (Spin Column-based method)، فرآیند استخراج را ساده و سریع می‌سازد و به طور موثر با چالش‌های منحصر به فرد استخراج RNA از بافت گیاهی مقابله می‌کند.

چالش‌های استخراج RNA از بافت‌های گیاهی و راه حل کیت پارس توس

بافت‌های گیاهی به دلیل داشتن دیواره سلولی سفت و مقادیر بالای ترکیبات ثانویه مانند پلی‌ساکاریدها، پلی‌فنول‌ها، پروتئین‌ها و همچنین آنزیم‌های ریبونوکلئاز (RNase) فراوان، به طور سنتی برای استخراج RNA چالش‌برانگیز بوده‌اند. آنزیم‌های RNase به سرعت RNA را تخریب می‌کنند، در حالی که ترکیبات ثانویه می‌توانند با RNA باند شده، خلوص آن را کاهش داده و فعالیت آنزیم‌ها را در واکنش‌های پایین‌دستی مهار کنند. "کیت استخراج RNA گیاهان پارس توس" با فرمولاسیون اختصاصی خود، این چالش‌ها را به طور موثر مدیریت می‌کند:

1. همگن‌سازی و لیز کارآمد:

   • "قبل از شروع فرآیند، نمونه‌ها باید در بافر لیزکننده همگن شوند." این مرحله مکانیکی، دیواره سلولی گیاهی را می‌شکند.

   • RL (Lysis Buffer): این بافر لیز حاوی دترجنت‌ها و عوامل کائوتروپیک قدرتمند است که به طور موثری سلول‌ها را لیز کرده، RNA را آزاد می‌کنند و در عین حال آنزیم‌های RNase را به سرعت غیرفعال می‌نمایند. این بافر همچنین به دناتوره کردن پروتئین‌ها و آزادسازی RNA کمک می‌کند.

2. حذف موثر آلاینده‌ها:

   • "تمام آلاینده‌ها از جمله پلی ساکاریدها و ترکیبات فنلی به طور موثر از بین می‌روند." این کیت با فرمولاسیون بافرهای خود و استفاده از روش ستونی، قادر است به طور موثر این ترکیبات مهارکننده را از RNA جدا کند.

   • کلروفرم: همانطور که در "نکات مهم" اشاره شده، نیاز به استفاده از کلروفرم (که توسط کاربر فراهم می‌شود) یکی از مراحل کلیدی در پروتکل این کیت است. کلروفرم به جداسازی فازهای آبی و آلی کمک کرده و به طور موثری لیپیدها و بسیاری از ترکیبات پلی‌فنولی را حذف می‌کند، که به افزایش چشمگیر خلوص RNA کمک می‌نماید.

3. اتصال انتخابی RNA به ستون (RNA Binding to Column):

   • Spin Columns (purple rings): هسته اصلی این کیت، ستون‌های چرخان حاوی یک غشای سیلیکا با ظرفیت بالا است. در حضور بافرهای مناسب و اتانول، RNA به طور انتخابی و محکم به این غشا متصل می‌شود. در حالی که آلاینده‌های پروتئینی، لیپیدها، و سایر ترکیبات مهارکننده از ستون عبور می‌کنند.

4. شستشو (Washing):

   • PW (Wash Buffer): این بافر برای حذف موثر آلاینده‌های غیرمتصل یا ضعیف متصل شده (مانند نمک‌ها و مهارکننده‌ها) استفاده می‌شود. شستشوی کامل با این بافرها و چرخش‌های مکرر، تضمین‌کننده خلوص بالای RNA نهایی است.

   • نکته مهم: قبل از شروع کار، کاربران باید اتانول (70% و 96%) را به بافرهای شستشو (که به صورت غلیظ در کیت ارائه شده‌اند) اضافه کنند.

5. جدا کردن و بازیابی RNA خالص (Elution):

   • RNase-free DEPC Water: در نهایت، RNA خالص شده با استفاده از آب عاری از RNase (DEPC Treated Water) از غشای سیلیکا جدا شده و در محلول معلق می‌شود. این آب به حفظ یکپارچگی RNA در بلندمدت کمک می‌کند.

اجزای کامل کیت استخراج RNA گیاهان پارس توس (50 تستی):

• RL (Lysis Buffer): بافر لیز اصلی برای شکستن سلول‌ها و غیرفعال کردن RNase.

• PW (Wash Buffer): بافر شستشو (نیاز به افزودن اتانول 70% و 96%).

• RNase-free DEPC Water: آب عاری از RNase برای جدا کردن RNA.

• Spin Columns (purple rings): ستون‌های حاوی غشای سیلیکا.

• Collection tubes: لوله‌های جمع‌آوری برای سانتریفیوژ و جمع‌آوری RNA.

ویژگی‌ها و مزایای برجسته کیت استخراج RNA گیاهان:

• روش ستونی سریع و کارآمد: کیت بر اساس روش ستونی طراحی شده است که فرآیند استخراج RNA را بسیار ساده و سریع می‌سازد، که برای آزمایشگاه‌های پرکار بسیار ارزشمند است.

• جداسازی Total RNA از انواع نمونه‌های گیاهی: این کیت برای استخراج RNA از 50 تا 100 میلی‌گرم بافت تازه یا منجمد، 25 میلی‌گرم بافت خشک، و یا 2 تا 1 میلیون سلول گیاهی مناسب است، که انعطاف‌پذیری بالایی را برای محققان فراهم می‌کند.

• RNA خالص با کیفیت بالا: RNA خالص سازی شده توسط این کیت، کیفیت بالایی دارد و عاری از DNA ژنومی، پروتئین‌ها، پلی‌ساکاریدها و ترکیبات فنلی است. این ویژگی آن را برای "بیشتر برنامه‌های پایین دستی" مناسب می‌سازد.

• سازگاری گسترده با کاربردهای پایین‌دستی: RNA خالص شده را می‌توان به طور مستقیم در کاربردهای حساسی مانند:

  • RT-PCR (Reverse Transcription PCR)

  • تجزیه و تحلیل Northern blot

  • نمایش افتراقی (Differential Display)

  • انتخاب پلی A+ RNA (برای جداسازی mRNA)

  • و سایر کاربردها مانند Real-Time RT-PCR (RT-qPCR) و RNA-Seq استفاده کرد.

• حذف موثر مهارکننده‌ها: پروتکل کیت به گونه‌ای طراحی شده که "تمام آلاینده‌ها از جمله پلی ساکاریدها و ترکیبات فنلی به طور موثر از بین می‌روند"، که این امر منجر به عملکرد عالی در واکنش‌های پایین‌دستی می‌شود.

• بسته‌بندی 50 تستی: این بسته‌بندی برای آزمایشگاه‌هایی که نیاز به حجم بالایی از استخراج دارند، مقرون به صرفه است.

نکات مهم قبل از شروع کار و نگهداری:

• فراهم کردن مواد جانبی: "جهت استفاده از این کیت باید این موارد فراهم گردد: 70%, 96% Ethanol و Chloroform." این مواد از اجزای کیت نیستند و باید توسط کاربر تهیه شوند.

• شرایط نگهداری: "این محصول باید در یخچال نگهداری شود." نگهداری در یخچال (معمولاً 4 درجه سانتی‌گراد) برای حفظ پایداری RNA و اجزای بافر حیاتی است.

نتیجه‌گیری

"کیت استخراج RNA گیاهان پارس توس" (Plant RNA Extraction Kit) یک راه حل جامع، قابل اعتماد و کارآمد برای جداسازی Total RNA با کیفیت بالا از بافت‌های گیاهی است. با پروتکل ساده، سریع و مبتنی بر ستون، و طراحی ویژه برای غلبه بر چالش‌های مربوط به آنزیم‌های RNase و ترکیبات ثانویه گیاهی، این کیت به محققان امکان می‌دهد تا به سرعت و با اطمینان، RNA لازم برای طیف وسیعی از کاربردهای بیولوژی مولکولی و ژنتیک گیاهی را به دست آورند. این محصول یک ابزار ضروری برای هر آزمایشگاه در حوزه فیزیولوژی گیاهی، ژنتیک گیاهی، اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی کشاورزی است که به دنبال نتایج دقیق و قابل تکرار در آنالیز بیان ژن هستند.