کیت استخراج RNA توتال

کیت استخراج RNA توتال پارس توس (Total RNA Extraction Kit): راه حلی جامع و سریع برای جداسازی RNA از طیف وسیعی از نمونه‌ها

استخراج RNA با کیفیت بالا و عاری از آلایندگی، یک گام حیاتی در بسیاری از تحقیقات پیشرفته بیولوژی مولکولی و کاربردهای تشخیصی است. RNA توتال (Total RNA) شامل تمامی گونه‌های RNA در یک سلول یا بافت (مانند mRNA، rRNA، tRNA و RNAهای غیرکدکننده) است و اطلاعات جامعی از وضعیت بیولوژیکی نمونه را ارائه می‌دهد. "کیت استخراج RNA توتال پارس توس" (Total RNA Extraction Kit) یک راه حل جامع و کارآمد برای جداسازی سریع و قابل اعتماد RNA توتال از طیف وسیعی از نمونه‌ها از جمله بافت‌های جانوری، خون، کشت سلول و باکتری‌های گرم منفی فراهم می‌کند. این کیت بر پایه روش ستون سیلیکا طراحی شده و به گونه‌ای فرموله گردیده تا RNA با خلوص بالا و یکپارچگی عالی را برای کاربردهای پایین‌دستی حساس فراهم آورد.

مکانیسم عمل و فناوری کیت استخراج RNA توتال پارس توس

این کیت با بهره‌گیری از ترکیبی از روش‌های شیمیایی و فیزیکی، به طور موثر RNA را از سایر اجزای سلولی و آلاینده‌ها جدا می‌کند. مراحل اصلی فرآیند استخراج به شرح زیر است:

1. لیز سلولی و محافظت از RNA:

   • RL (Lysis Buffer): این کیت از یک "بافر فنولیک با خاصیت دناتوره کننده بالا" برای لیز کردن نمونه استفاده می‌کند. این بافر قدرتمند به سرعت سلول‌ها را لیز کرده، RNA را آزاد می‌نماید و همزمان آنزیم‌های ریبونوکلئاز (RNase) را به طور موثر دناتوره و غیرفعال می‌کند. این عمل بسیار مهم است، زیرا RNaseها می‌توانند به سرعت RNA را تخریب کنند. "نمونه تحت شرایط بافر فنولیک با خاصیت دناتوره کننده بالا لیز می شود تا RNA بافت را از تخریب محافظت کند."

2. جداسازی فازی و حذف پروتئین/DNA:

   • پس از لیز، معمولاً کلروفرم (که باید توسط کاربر فراهم شود) به نمونه اضافه می‌شود. سانتریفیوژ به جداسازی فازهای آلی، آبی و میانی کمک می‌کند. در این مرحله، پروتئین‌ها و لیپیدها به فاز آلی یا فاز میانی منتقل می‌شوند، در حالی که RNA در فاز آبی باقی می‌ماند. این کیت همچنین به طور موثر DNA ژنومی را حذف می‌کند.

3. اتصال انتخابی RNA به ستون (RNA Binding to Column):

   • پس از جداسازی فازی، فاز آبی حاوی RNA جمع‌آوری شده و با اتانول 70% یا 96% (که باید توسط کاربر فراهم شود) ترکیب می‌شود.

   • مخلوط آماده شده روی یک ستون چرخان (Spin Column) که حاوی یک غشای سیلیکا با ظرفیت بالا است، بارگذاری می‌شود. در حضور غلظت بالای نمک و اتانول، RNA به طور انتخابی و محکم به غشای سیلیکا متصل می‌شود. آلاینده‌های باقی‌مانده و مهارکننده‌ها از ستون عبور می‌کنند.

4. شستشو (Washing):

   • PW (Wash Buffer): ستون با استفاده از بافر شستشو (PW) که از قبل با اتانول مناسب ترکیب شده است، شسته می‌شود. این مرحله برای حذف کامل نمک‌ها، پروتئین‌های باقی‌مانده و سایر مهارکننده‌ها از RNA متصل شده به غشا ضروری است. شستشوی کامل و خشک کردن غشا (با سانتریفیوژ) به اطمینان از خلوص نهایی RNA کمک می‌کند.

5. جدا کردن و بازیابی RNA خالص (Elution):

   • RNase-free DEPC Water: در نهایت، RNA خالص شده با استفاده از آب عاری از RNase (DEPC Treated Water) از غشای سیلیکا جدا شده و در محلول معلق می‌شود. این بافر به حفظ یکپارچگی و پایداری RNA برای ذخیره‌سازی طولانی‌مدت کمک می‌کند.

اجزای کامل کیت استخراج RNA توتال پارس توس (50 تستی):

• RL (Lysis Buffer): بافر اصلی برای لیز سلول‌ها و محافظت از RNA.

• PW (Wash Buffer): بافر شستشو (نیاز به افزودن اتانول 70% یا 96%).

• RNase-free DEPC Water: آب عاری از RNase برای جدا کردن RNA.

• Spin Columns (purple rings): ستون‌های اصلی حاوی غشای سیلیکا برای اتصال RNA.

• Collection tubes: لوله‌های جمع‌آوری برای سانتریفیوژ و جمع‌آوری RNA.

ویژگی‌ها و مزایای برجسته کیت استخراج RNA توتال:

• گستردگی کاربرد در استخراج RNA از:

  • بافت‌های حیوانی: برای استخراج RNA از انواع بافت‌های جانوری (مثلاً 20 تا 40 میلی‌گرم بافت، 20 میلی‌گرم برای کبد یا طحال).

  • کشت سلول: مناسب برای استخراج RNA از حداقل 1×106 تا 2×106 سلول کشت شده.

  • خون: قابل استفاده برای استخراج RNA از 150μL خون.

  • باکتری گرم منفی: سازگار با 3 تا 5 میلی‌لیتر محیط کشت باکتریایی (با سانتریفیوژ و کار روی پلت باکتری).

• پروتکل سریع و کارآمد: این کیت "امکان پردازش همزمان چندین نمونه بافت را در کمتر از 30 دقیقه فراهم می‌کند." این سرعت، کارایی آزمایشگاه را به شدت افزایش می‌دهد.

• RNA با کیفیت بالا و خالص: "این روش آلودگی‌ها و مهارکننده‌های آنزیمی را کاملاً از بین می‌برد و باعث جداسازی سریع، راحت و قابل اعتماد RNA می‌گردد." RNA استخراج شده دارای خلوص بالا (بدون آلودگی DNA ژنومی، پروتئین‌ها و سایر مهارکننده‌ها) و یکپارچگی خوب است.

• حفاظت عالی از RNA: بافر لیز فنولیک با خاصیت دناتوره کننده بالا، از تخریب RNA توسط RNaseها به محض لیز سلولی محافظت می‌کند.

• سازگاری با کاربردهای پایین‌دستی: RNA خالص شده برای طیف وسیعی از کاربردهای حساس پایین‌دستی مانند Real-Time RT-PCR (RT-qPCR)، ساخت کتابخانه‌های cDNA، RNA-Seq، Northern blotting، و سایر آنالیزهای بیان ژن مناسب است.

• بسته‌بندی 50 تستی: این بسته‌بندی برای آزمایشگاه‌هایی با حجم بالای نمونه‌گیری مناسب و مقرون به صرفه است.

نکات مهم قبل از شروع کار و نگهداری:

• فراهم کردن مواد جانبی: "اجزایی که باید فراهم گردند: Chloroform و Ethanol 70% or 96%." این مواد از اجزای کیت نیستند و باید توسط کاربر تهیه شوند.

• شرایط نگهداری: "این محصول باید در یخچال نگهداری شود." نگهداری در یخچال (معمولاً 4 درجه سانتی‌گراد) برای حفظ پایداری RNA و اجزای بافر حیاتی است.

نتیجه‌گیری

"کیت استخراج RNA توتال پارس توس" (Total RNA Extraction Kit) یک راه حل جامع، قابل اعتماد و کارآمد برای جداسازی Total RNA با کیفیت بالا از طیف وسیعی از نمونه‌های بیولوژیکی است. با پروتکل سریع و ساده مبتنی بر ستون، و طراحی ویژه برای مقابله با چالش‌های مربوط به RNaseها و آلاینده‌ها، این کیت به محققان و متخصصان امکان می‌دهد تا به سرعت و با اطمینان، RNA لازم برای طیف وسیعی از مطالعات ژنتیکی، تشخیصی و بیولوژیکی را به دست آورند. این محصول یک ابزار ضروری در هر آزمایشگاه تحقیقاتی و تشخیص مولکولی محسوب می‌شود که به دنبال نتایج دقیق و قابل تکرار در آنالیز بیان ژن هستند.