کیت استخراج DNA گیاهان

کیت استخراج DNA گیاهان پارس توس (Plant DNA Extraction Kit): راه حل جامع و کارآمد برای DNA ژنومی گیاهی با کیفیت بالا

در دنیای رو به رشد تحقیقات بیولوژی گیاهی، ژنتیک و بیوتکنولوژی کشاورزی، استخراج DNA ژنومی با کیفیت بالا، اولین و حیاتی‌ترین گام برای هر پروژه تحقیقاتی موفق است. DNA استخراج شده به عنوان ماده اولیه برای طیف وسیعی از کاربردهای پایین‌دستی از جمله واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR)، Real-Time PCR (qPCR)، تعیین توالی (Sequencing)، کلونینگ، تجزیه و تحلیل مارکرهای مولکولی (مانند SSRs و SNPs)، و مطالعات ژنومی عمیق‌تر عمل می‌کند. "کیت استخراج DNA گیاهان پارس توس" (Plant DNA Extraction Kit) یک راه حل بهینه و قابل اعتماد را برای جداسازی DNA ژنومی خالص و سالم از انواع مختلف نمونه‌های گیاهی ارائه می‌دهد. این کیت با بهره‌گیری از یک روش ستونی (Spin Column-based method)، فرآیند استخراج را به طور چشمگیری ساده، سریع و قابل تکرار می‌سازد، در حالی که چالش‌های منحصر به فرد استخراج DNA از بافت گیاهی را به طور موثر مدیریت می‌کند.

چالش‌های استخراج DNA از بافت‌های گیاهی و راه حل هوشمندانه کیت پارس توس

بافت‌های گیاهی به دلیل داشتن دیواره سلولی سفت و وجود مقادیر متغیری از ترکیبات ثانویه (مانند پلی‌فنول‌ها، پلی‌ساکاریدها، لیپیدها و پروتئین‌ها) که می‌توانند DNA را تخریب کرده، آنزیم‌ها را مهار کنند یا منجر به کاهش بازده و خلوص DNA شوند، به طور سنتی برای استخراج DNA چالش‌برانگیز بوده‌اند. "کیت استخراج DNA گیاهان پارس توس" با فرمولاسیون اختصاصی و مهندسی شده خود، به طور موثر با این چالش‌ها مقابله می‌کند:

1. لیز کارآمد سلولی و تجزیه پروتئین‌ها:

   • PPL (Plant Lysis Buffer): این بافر لیز مخصوص گیاهی، حاوی ترکیبات دترجنت قوی و عوامل کاهنده است که به طور موثری دیواره سلولی و غشای سلولی گیاهی را می‌شکند. این فرآیند باعث آزاد شدن محتویات سلولی، از جمله DNA می‌شود.

   • Proteinase K: یک آنزیم پروتئولیتیک بسیار فعال است که پروتئین‌ها را به طور کامل تجزیه می‌کند. این شامل هیستون‌ها (که DNA را فشرده می‌کنند)، نوکلئازها (که می‌توانند DNA را تخریب کنند) و سایر پروتئین‌های مزاحم است. این عمل نه تنها DNA را آزاد می‌کند بلکه از آن در برابر تخریب آنزیمی محافظت می‌نماید. (نکته: پروتئیناز K به صورت پودر لیوفیلیزه ارائه شده و برای حفظ فعالیت بهینه، باید در فریزر 20- درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. پس از حل شدن با PK Solution، باید طبق دستورالعمل نگهداری شود.)

2. حذف موثر مهارکننده‌ها و آلاینده‌ها:

   • کلروفرم: همانطور که در نکات مهم اشاره شده، نیاز به استفاده از کلروفرم (که توسط کاربر فراهم می‌شود) یکی از نقاط کلیدی در پروتکل این کیت است. کلروفرم به جداسازی فازهای آبی و آلی کمک می‌کند و به طور موثری لیپیدها، پلی‌فنول‌ها و سایر ترکیبات غیرقطبی مهارکننده را حذف می‌کند. این مرحله به افزایش چشمگیر خلوص DNA کمک می‌کند.

   • PTB (Plant Tissue Binding Buffer): این بافر حاوی نمک‌های کائوتروپیک است که به دناتوره کردن پروتئین‌های باقی‌مانده و ایجاد شرایط بهینه یونی برای اتصال DNA به غشای سیلیکا کمک می‌کند.

3. اتصال انتخابی و شستشوی کارآمد در ستون‌های چرخان (Spin Columns):

   • Spin Columns: هسته اصلی این کیت، ستون‌های چرخان حاوی یک غشای سیلیکا با ظرفیت بالا است. در حضور نمک‌های کائوتروپیک (از بافر PTB) و اتانول (که باید توسط کاربر اضافه شود)، DNA به طور انتخابی و محکم به این غشا متصل می‌شود.

   • PW1 و PW2 (Wash Buffers): این بافرها برای حذف موثر آلاینده‌های غیرمتصل یا ضعیف متصل شده (مانند نمک‌ها، پروتئین‌های کوچک، پلی‌ساکاریدها و سایر مهارکننده‌های آنزیمی) استفاده می‌شوند. شستشوی کامل با این بافرها و چرخش‌های مکرر، تضمین‌کننده خلوص بالای DNA نهایی است. (نکته: قبل از شروع کار، اتانول مطلق باید به این بافرهای غلیظ اضافه شود.)

4. جدا کردن و بازیابی DNA خالص (Elution):

   • PE (Elution Buffer): در نهایت، DNA خالص شده با استفاده از این بافر (معمولاً یک بافر با pH قلیایی ملایم یا آب عاری از نوکلئاز) از غشای سیلیکا جدا شده و در محلول معلق می‌شود. این بافر به حفظ پایداری DNA در بلندمدت کمک می‌کند.

اجزای کامل کیت استخراج DNA گیاهان پارس توس (50 تستی):

• PPL (Plant Lysis Buffer): بافر اصلی برای لیز بافت گیاهی.

• PTB (Plant Tissue Binding Buffer): بافر حاوی نمک‌های کائوتروپیک برای اتصال DNA به غشا.

• PW1 (Wash Buffer): بافر شستشوی اول (نیاز به افزودن اتانول مطلق).

• PW2 (Wash Buffer): بافر شستشوی دوم و نهایی (نیاز به افزودن اتانول مطلق).

• PE (Elution Buffer): بافر برای جداسازی DNA خالص.

• Proteinase K (Lyophilized Powder) + PK Solution: آنزیم پروتئیناز K به همراه محلول حلال آن.

• Spin Columns: ستون‌های اصلی حاوی غشای سیلیکا.

• Collection tubes: لوله‌های جمع‌آوری برای سانتریفیوژ و جمع‌آوری DNA.

ویژگی‌ها و مزایای کلیدی کیت استخراج DNA گیاهان پارس توس:

• سریع، راحت و کارآمد: پروتکل ساده و مبتنی بر ستون، فرآیند استخراج DNA را به طور قابل توجهی تسریع می‌بخشد، بدون نیاز به مراحل پیچیده ته نشینی یا حلال‌های آلی خطرناک (به جز مرحله کلروفرم برای حذف آلاینده‌ها).

• بازده و کیفیت بالای DNA: با فرمولاسیون بهینه شرایط لیز و ماتریس ستون، این کیت "بازیافت DNA ژنومی با کیفیت بالا" را از طیف گسترده‌ای از نمونه‌های گیاهی تضمین می‌کند. DNA استخراج شده بسیار خالص است و عاری از پروتئین‌ها، پلی‌ساکاریدها، پلی‌فنول‌ها و مهارکننده‌های آنزیمی می‌باشد.

• سازگاری گسترده با نمونه‌های گیاهی: کیت "روی طیف گسترده ای از نمونه های گیاهی کاربرد دارد." این شامل 100-150 میلی‌گرم بافت تازه یا منجمد و 50-100 میلی‌گرم بافت خشک گیاه است. این انعطاف‌پذیری، آن را برای انواع پروژه‌های تحقیقاتی گیاهی مناسب می‌سازد.

• حذف معرف‌های خطرناک سنتی (فنل): "در این کیت از معرف‌های خطرناک از قبیل فنل استفاده نمی‌شود." این ویژگی ایمنی کاربر را افزایش داده و نیاز به دفع پسماندهای شیمیایی خطرناک را کاهش می‌دهد.

• کاربردپذیری گسترده: DNA خالص شده "ایده آل برای استفاده در همه برنامه های پایین دستی" است. این بدان معناست که DNA استخراج شده به خوبی در PCR، Real-Time PCR، هضم با آنزیم‌های محدود کننده، تعیین توالی، Southern blotting و سایر تکنیک‌های بیولوژی مولکولی عمل می‌کند.

• کنترل کیفیت بالا: محصولات پارس توس با استانداردهای کنترل کیفیت سخت‌گیرانه تولید می‌شوند تا نتایج قابل تکرار و قابل اعتماد را تضمین کنند.

نکات مهم قبل از شروع کار:

• فراهم کردن مواد جانبی: "قبل از شروع کار با کیت لطفا اتانول مطلق (Absolute Ethanol) و کلروفرم فراهم گردد." این مواد از اجزای کیت نیستند و باید توسط کاربر تهیه شوند.

• شرایط نگهداری: این محصول دارای دو بخش است: Proteinase K (پودر لیوفیلیزه) که باید در فریزر 20- درجه سانتی‌گراد نگهداری شود و سایر اجزای کیت (بافرها، ستون‌ها، لوله‌ها) که باید در دمای اتاق نگهداری شوند.

نتیجه‌گیری

"کیت استخراج DNA گیاهان پارس توس" (Plant DNA Extraction Kit) یک راه حل جامع، قابل اعتماد و کارآمد برای جداسازی DNA ژنومی با کیفیت بالا از بافت‌های گیاهی است. این کیت با پروتکل ساده، سریع و ایمن مبتنی بر ستون، و طراحی ویژه برای غلبه بر چالش‌های مربوط به ترکیبات ثانویه گیاهی، به محققان امکان می‌دهد تا به سرعت و با اطمینان، DNA لازم برای طیف وسیعی از کاربردهای بیولوژی مولکولی و ژنتیک گیاهی را به دست آورند. این محصول یک ابزار ضروری برای هر آزمایشگاه در حوزه ژنتیک گیاهی، اصلاح نباتات، فیزیولوژی گیاهی و بیوتکنولوژی کشاورزی محسوب می‌شود که به دنبال نتایج دقیق و قابل تکرار هستند.