کیت استخراج DNA ژنومی از بافت

کیت استخراج DNA ژنومی از بافت پارس توس (Tissue Genomic DNA Extraction Kit): استخراج DNA خالص و با کیفیت از بافت‌های حیوانی

استخراج DNA ژنومی با کیفیت بالا، اولین و حیاتی‌ترین گام در بسیاری از کاربردهای بیولوژی مولکولی مدرن، از جمله PCR، Real-Time PCR، تعیین توالی (Sequencing)، کلونینگ، تجزیه و تحلیل پلی‌مورفیسم تک‌نوکلئوتیدی (SNP Analysis)، و مطالعات ژنتیکی است. "کیت استخراج DNA ژنومی از بافت پارس توس" (Tissue Genomic DNA Extraction Kit) یک راه حل جامع و کارآمد برای استخراج DNA ژنومی خالص و سالم از طیف وسیعی از بافت‌های حیوانی را ارائه می‌دهد. این کیت با استفاده از روش ستونی (Spin Column-based method)، فرآیند استخراج را ساده، سریع و قابل تکرار می‌سازد.

مکانیسم عمل و فناوری کیت استخراج DNA ژنومی از بافت پارس توس

این کیت بر پایه ترکیبی از لیز شیمیایی سلول، تجزیه پروتئین و جذب انتخابی DNA به یک غشای سیلیکا در شرایط خاص استوار است. مراحل اصلی فرآیند استخراج به شرح زیر است:

1. لیز سلولی (Cell Lysis):

   • کیت از پروتئیناز K و نمک‌های کائوتروپیک (Chaotropic Salts) برای لیز کارآمد سلول‌ها و بافت‌ها استفاده می‌کند.

   • پروتئیناز K: یک آنزیم پروتئولیتیک قوی است که قادر به تجزیه پروتئین‌ها، از جمله هیستون‌ها (که DNA را فشرده می‌کنند)، نوکلئازها (که می‌توانند DNA را تخریب کنند) و سایر پروتئین‌های سلولی است. این عمل باعث آزاد شدن DNA از ساختارهای سلولی و محافظت از آن در برابر تخریب آنزیمی می‌شود. این بخش از کیت (پروتئیناز K) برای حفظ فعالیت بهینه، باید در فریزر 20- درجه سانتی‌گراد نگهداری شود.

   • نمک‌های کائوتروپیک: این نمک‌ها (مانند گوانیدین تیوسیانات) به دناتوره کردن پروتئین‌ها و غیرفعال کردن آنزیم‌های نوکلئاز کمک می‌کنند. همچنین، آن‌ها با ایجاد یک محیط یونی قوی، شرایطی را فراهم می‌کنند که DNA بتواند به غشای سیلیکا متصل شود.

2. اتصال DNA به ستون (DNA Binding to Column):

   • پس از لیز و اضافه شدن اتانول، نمونه لیز شده روی یک ستون چرخان (Spin Column) حاوی یک غشای سیلیکا (سیلیس) بارگذاری می‌شود.

   • در حضور نمک‌های کائوتروپیک و اتانول، DNA به طور انتخابی به غشای سیلیکا در ستون متصل می‌شود، در حالی که پروتئین‌ها، لیپیدها و سایر آلاینده‌ها از ستون عبور می‌کنند.

3. شستشو (Washing):

   • ستون با استفاده از بافرهای شستشو (مانانند Wash Buffer PW1 و Wash Buffer PW2) شسته می‌شود. این بافرها آلاینده‌های باقی‌مانده را که به غشا متصل نشده‌اند یا به طور ضعیف متصل شده‌اند (مانند نمک‌ها، پروتئین‌های کوچک، و مهارکننده‌های واکنش‌های پایین‌دستی) حذف می‌کنند، در حالی که DNA همچنان به غشا متصل باقی می‌ماند.

   • نکته مهم: قبل از شروع کار، کاربران باید اتانول مطلق (Absolute Ethanol) را به بافرهای شستشو (که به صورت غلیظ در کیت ارائه شده‌اند) اضافه کنند.

4. شستشوی نهایی و خشک کردن (Final Wash and Drying):

   • یک مرحله شستشوی نهایی و چرخش سریع برای حذف کامل بافرهای شستشو و اتانول اضافی از غشا انجام می‌شود. حذف کامل اتانول بسیار مهم است، زیرا اتانول می‌تواند فعالیت آنزیم‌ها را در کاربردهای پایین‌دستی مهار کند.

5. جدا کردن DNA (Elution):

   • در نهایت، DNA خالص شده با استفاده از یک بافر جداسازی (Elution Buffer - PE) که معمولاً یک بافر با pH قلیایی ملایم (مانند TE Buffer یا آب عاری از نوکلئاز) است، از غشای سیلیکا جدا می‌شود. این بافر DNA را از غشا آزاد کرده و آن را در محلول معلق نگه می‌دارد.

اجزای کیت استخراج DNA ژنومی از بافت پارس توس:

• PL (Lysis Buffer): بافر لیز برای شکستن سلول‌ها و حل کردن اجزای سلولی.

• PTB (Tissue Binding Buffer): بافر اتصال برای فراهم کردن شرایط بهینه اتصال DNA به غشای سیلیکا.

• PW1 (Wash Buffer): بافر شستشوی اول برای حذف آلاینده‌های اصلی. (نیاز به افزودن اتانول مطلق)

• PW2 (Wash Buffer): بافر شستشوی دوم برای شستشوی کامل‌تر و حذف نمک‌ها. (نیاز به افزودن اتانول مطلق)

• PE (Elution Buffer): بافر جداسازی برای آزاد کردن DNA خالص از ستون.

• Proteinase K + PK Solution (Lyophilized Powder): پودر لیوفیلیزه پروتئیناز K که باید با محلول PK (موجود در کیت) حل شود.

• Spin columns: ستون‌های اصلی حاوی غشای سیلیکا برای اتصال DNA.

• Collection tubes: لوله‌های جمع‌آوری برای جمع‌آوری فیلترات و DNA جداسازی شده.

ویژگی‌ها و مزایای برجسته کیت استخراج DNA ژنومی از بافت:

1. استخراج DNA ژنومی از طیف وسیعی از بافت‌های حیوانی: این کیت برای استخراج DNA از بافت‌های رایج مانند کبد، کلیه، مغز و بسیاری دیگر از بافت‌های حیوانی طراحی شده است.

2. پروتکل آسان و سریع: با استفاده از روش ستونی، فرآیند استخراج DNA بسیار ساده و کارآمد است. "زمان آماده‌سازی برای یک نمونه کمتر از 45 دقیقه" است که سرعت بالایی برای آزمایشگاه‌های پرکار فراهم می‌کند.

3. فاقد مرحله ته نشینی (Precipitation): برخلاف روش‌های سنتی (مانند فنل-کلروفرم یا رسوب با اتانول) که مراحل ته نشینی طولانی و پیچیده دارند، این کیت نیازی به این مراحل ندارد، که خطاهای مربوط به حمل و نقل و از دست رفتن نمونه را کاهش می‌دهد.

4. DNA خالص با کیفیت بالا: DNA استخراج شده توسط این کیت، خلوص بالایی دارد و عاری از آلاینده‌هایی مانند پروتئین‌ها، نمک‌ها، پلی‌ساکاریدها و مهارکننده‌های آنزیمی است.

5. سازگاری کامل با کاربردهای پایین‌دستی: DNA خالص شده "با تمام آنزیم‌های محدود کننده آزمایش شده کاملاً قابل هضم است و با برنامه‌های پایین دستی کاملاً سازگار است." این شامل PCR، Real-Time PCR، تعیین توالی، کلونینگ و سایر کاربردها می‌شود.

6. مقادیر بافت مورد نیاز: بسته به نوع بافت، "میزان 20 میلی‌گرم بافت (10 میلی‌گرم بافت طحال یا کبد) مورد نیاز است." این مقادیر کم برای نمونه‌های ارزشمند یا محدود، بسیار مناسب است.

7. کیفیت تضمین شده: محصولات پارس توس با استانداردهای کنترل کیفیت بالا تولید می‌شوند، که کیفیت و قابلیت اطمینان این کیت را تضمین می‌کند.

ملاحظات خاص برای بافت‌های ویژه:

• بافت استخوان: "در مورد بافت استخوان ابتدا باید عمل دکلسیفیکاسیون (Decalcification) انجام شده و بعد برای استخراج DNA مورد استفاده قرار گیرد." این مرحله برای حذف کلسیم از ماتریس استخوانی ضروری است که در غیر این صورت می‌تواند مانع لیز سلولی و استخراج DNA شود.

بسته‌بندی و نگهداری:

این کیت در بسته‌بندی 50 تستی عرضه می‌شود. برای حفظ پایداری اجزا:

• بخش پروتئیناز K (Lyophilized Powder) باید در فریزر 20- درجه سانتی‌گراد نگهداری شود.

• سایر اجزا (بافرها و ستون‌ها) باید در دمای اتاق نگهداری شوند.

نکات مهم قبل از شروع کار:

• اطمینان حاصل کنید که اتانول مطلق (Absolute Ethanol) در دسترس است، زیرا باید قبل از استفاده به بافرهای شستشو اضافه شود.

نتیجه‌گیری:

کیت استخراج DNA ژنومی از بافت پارس توس (Tissue Genomic DNA Extraction Kit) یک راه حل قابل اعتماد، سریع و کارآمد برای محققانی است که نیاز به استخراج DNA ژنومی با کیفیت بالا از بافت‌های حیوانی دارند. با پروتکل ساده مبتنی بر ستون، استفاده از پروتئیناز K و نمک‌های کائوتروپیک، و تولید DNA خالص و سازگار با انواع کاربردهای پایین‌دستی، این کیت یک ابزار ضروری در آزمایشگاه‌های تحقیقاتی و تشخیصی در زمینه ژنتیک، بیولوژی مولکولی و علوم زیستی است.