لودینگ دو رنگ DNA (6X)

لودینگ دو رنگ DNA (6X) پارس توس (6X DuoColor DNA Loading Dye Pars Toos) یک محلول متراکم (6 برابر غلظت کاری) است که برای مخلوط کردن با نمونه‌های DNA قبل از بارگذاری آن‌ها در چاهک‌های ژل آگارز یا پلی‌آکریل‌آمید در روش الکتروفورز مورد استفاده قرار می‌گیرد. این محلول حاوی دو رنگ ردیابی است: زایلن سیانول FF (Xylene cyanol FF) و بروموفنل بلو (Bromophenol blue). این رنگ‌ها به کاربر کمک می‌کنند تا پیشرفت مهاجرت DNA در طول الکتروفورز را به صورت بصری ردیابی کند و از خروج قطعات کوچک DNA از ژل جلوگیری نماید.

ویژگی‌های لودینگ دو رنگ DNA (6X) پارس توس:

• غلظت 6X: این محصول به صورت یک محلول 6 برابر غلیظ ارائه می‌شود. این بدان معناست که برای استفاده، باید آن را با نمونه DNA به نسبت 1 به 5 (یک حجم لودینگ دای به ازای هر 5 حجم نمونه DNA) مخلوط کنید.

• دو رنگ ردیابی: این لودینگ دای حاوی دو رنگ زایلن سیانول FF (آبی) و بروموفنل بلو (آبی) است. این دو رنگ در طول الکتروفورز با سرعت‌های متفاوتی مهاجرت می‌کنند و به کاربر امکان می‌دهند تا محدوده تقریبی اندازه DNA در حال جداسازی را تخمین بزند.

  • بروموفنل بلو: یک رنگ با حرکت سریع‌تر است و معمولاً با DNA به طول تقریبی 300 جفت باز (bp) در ژل آگارز 1% هم‌مهاجرت می‌کند.

  • زایلن سیانول FF: یک رنگ با حرکت کندتر است و معمولاً با DNA به طول تقریبی 4 کیلوباز (kb) در ژل آگارز 1% هم‌مهاجرت می‌کند.

• ردیابی بصری: وجود این دو رنگ امکان ردیابی آسان و بصری پیشرفت الکتروفورز را فراهم می‌کند. کاربر می‌تواند ببیند که نمونه DNA در حال حرکت در ژل است و چه زمانی الکتروفورز به حد مطلوب رسیده است.

• جلوگیری از خروج DNA از ژل: رنگ‌های ردیابی معمولاً از DNAهای کوچک‌تر کمی سریع‌تر حرکت می‌کنند. هنگامی که رنگ ردیابی به انتهای ژل نزدیک می‌شود، نشان می‌دهد که الکتروفورز باید متوقف شود تا از خروج قطعات کوچک DNA از ژل جلوگیری گردد.

• سهولت استفاده: غلظت 6X استفاده از آن را آسان می‌کند. کافی است مقدار مناسب از لودینگ دای را با نمونه DNA مخلوط کرده و سپس در چاهک ژل بارگذاری کنید.

• سازگاری با ژل‌های آگارز و پلی‌آکریل‌آمید: این لودینگ دای برای استفاده در هر دو نوع ژل آگارز و پلی‌آکریل‌آمید مناسب است.

نحوه استفاده از لودینگ دو رنگ DNA (6X) پارس توس:

1. تهیه مخلوط لودینگ دای و نمونه DNA: به ازای هر 5 حجم از نمونه DNA، 1 حجم از لودینگ دو رنگ DNA (6X) پارس توس را به آن اضافه کنید. به عنوان مثال، اگر 5 میکرولیتر نمونه DNA دارید، 1 میکرولیتر لودینگ دای اضافه کنید تا حجم نهایی 6 میکرولیتر شود.

2. مخلوط کردن: محلول را به آرامی و به خوبی مخلوط کنید تا لودینگ دای به طور یکنواخت در نمونه DNA پخش شود. برای این کار می‌توانید از یک پیپت برای بالا و پایین کشیدن آرام محلول استفاده کنید.

3. بارگذاری در چاهک ژل: مخلوط نمونه DNA و لودینگ دای را با دقت در چاهک‌های ژل آگارز یا پلی‌آکریل‌آمید بارگذاری کنید. لودینگ دای به دلیل داشتن یک عامل سنگین کننده (مانند گلیسرول)، به نشستن نمونه در ته چاهک کمک می‌کند.

4. اجرای الکتروفورز: الکتروفورز را طبق پروتکل معمول خود انجام دهید. حرکت رنگ‌های بروموفنل بلو و زایلن سیانول FF را در طول ژل مشاهده کنید تا پیشرفت جداسازی DNA را ردیابی نمایید.

5. توقف الکتروفورز: هنگامی که رنگ ردیابی (معمولاً بروموفنل بلو برای قطعات کوچک‌تر و زایلن سیانول FF برای قطعات بزرگ‌تر) به حدود 75-80% طول ژل رسید، الکتروفورز را متوقف کنید.

رنگ نارنجی G:

در توضیحات شما به رنگ نارنجی G نیز اشاره شده است که سریع‌تر از بروموفنل بلو و زایلن سیانول FF مهاجرت می‌کند و با DNA به طول 10 تا 20 نوکلئوتید هم‌مهاجرت می‌کند. با این حال، در توضیحات مربوط به لودینگ دو رنگ DNA (6X) پارس توس، فقط به وجود رنگ‌های زایلن سیانول FF و بروموفنل بلو اشاره شده است. احتمالاً رنگ نارنجی G در فرمولاسیون‌های لودینگ دای دیگری از همین شرکت یا سایر تولیدکنندگان وجود دارد. اگر لودینگ دای مورد نظر شما فقط حاوی زایلن سیانول FF و بروموفنل بلو است، از اطلاعات مربوط به آن دو رنگ برای ردیابی استفاده کنید.

نتیجه‌گیری:

لودینگ دو رنگ DNA (6X) پارس توس یک ابزار ساده و کارآمد برای آماده‌سازی نمونه‌های DNA قبل از الکتروفورز است. وجود دو رنگ ردیابی با سرعت‌های مهاجرت متفاوت، امکان نظارت دقیق بر پیشرفت الکتروفورز را فراهم می‌کند و به جلوگیری از خروج قطعات کوچک DNA از ژل کمک می‌کند. استفاده از این لودینگ دای با غلظت مناسب، یک مرحله ضروری در فرآیند الکتروفورز ژل آگارز و پلی‌آکریل‌آمید برای جداسازی و آنالیز DNA است.