لدر DNA 100 bp

لدر DNA 100 bp پارس توس (100bp DNA Marker Pars Toos) یک مخلوط آماده مصرف یا غلیظ شده از قطعات DNA دورشته‌ای با طول‌های مشخص است که به طور ویژه برای تعیین دقیق اندازه قطعات DNA تولید شده در واکنش PCR (واکنش زنجیره‌ای پلیمراز) و قطعات DNA مهندسی شده در ژل آگارز مورد استفاده قرار می‌گیرد. این مارکر DNA به عنوان یک استاندارد اندازه عمل می‌کند و به محققان کمک می‌کند تا طول قطعات DNA نمونه خود را پس از انجام الکتروفورز ژل آگارز تخمین بزنند.

ویژگی‌های لدر DNA 100 bp پارس توس:

• محدوده اندازه: این مارکر شامل 11 قطعه DNA دورشته‌ای با اندازه‌های مرجع مختلف است که از 100 جفت باز (bp) تا 1500 جفت باز متغیر است. این محدوده اندازه، امکان تعیین سایز دقیق قطعات DNA با طول‌های متفاوت را فراهم می‌کند.

• باندهای برجسته: باندهای DNA با طول 500 bp و 1000 bp در این مارکر، دو تا سه برابر روشن‌تر از سایر باندها هستند. این ویژگی به کاربر کمک می‌کند تا به راحتی این باندهای مرجع را در ژل شناسایی کرده و از آن‌ها برای تخمین دقیق‌تر اندازه قطعات DNA نمونه استفاده کند.

• آماده مصرف: لدر DNA 100 bp پارس توس به صورت پیش مخلوط شده با بافر لودینگ (loading buffer) عرضه می‌گردد. این امر نیاز به افزودن بافر لودینگ جداگانه به مارکر قبل از بارگذاری در ژل را از بین می‌برد و فرآیند الکتروفورز را ساده‌تر و سریع‌تر می‌کند. بافر لودینگ موجود معمولاً حاوی یک عامل سنگین کننده (برای کمک به نشستن DNA در چاهک) و یک یا چند رنگ ردیابی (برای نظارت بر پیشرفت الکتروفورز) است.

• سازگاری با رنگ‌های مختلف: این مارکر DNA را می‌توان پس از الکتروفورز با رنگ‌های متداول مورد استفاده برای DNA در ژل آگارز، از جمله اتیدیوم بروماید (EtBr) و DNA Green Viewer (یک رنگ فلورسنت ایمن‌تر)، رنگ‌آمیزی و مشاهده کرد.

• عدم مناسبت برای آنالیز کمی: بر اساس توضیحات، این مارکر DNA به طور خاص برای تعیین اندازه قطعات DNA طراحی شده است و برای آنالیزهای کمی دقیق (مانند تعیین مقدار دقیق DNA در یک باند) مناسب نمی‌باشد. شدت باندها ممکن است دقیقاً منعکس کننده مقدار DNA نباشد و برای اهداف کمی کالیبراسیون‌های جداگانه مورد نیاز است.

• بسته‌بندی: این محصول در بسته‌بندی 0.5 میلی‌لیتری عرضه می‌شود و حاوی 50 میکروگرم DNA کل است. این مقدار برای تعداد زیادی از آزمایش‌های الکتروفورز کافی است.

• شرایط نگهداری: برای حفظ کیفیت و پایداری DNA، این محصول باید در فریزر با دمای -20 درجه سانتیگراد نگهداری شود. نگهداری در دمای مناسب از تخریب DNA جلوگیری می‌کند.

کاربرد لدر DNA 100 bp پارس توس:

اصلی‌ترین کاربرد لدر DNA 100 bp پارس توس، تعیین اندازه قطعات DNA پس از انجام الکتروفورز ژل آگارز است. این شامل موارد زیر می‌شود:

• تعیین اندازه محصولات PCR: پس از تکثیر DNA با استفاده از PCR، از این مارکر برای تخمین طول قطعات DNA تکثیر شده استفاده می‌شود. این امر به تأیید اندازه مورد انتظار محصول PCR کمک می‌کند.

• تعیین اندازه قطعات DNA مهندسی شده: در فرآیندهای کلونینگ و دستکاری DNA، از این مارکر برای تعیین اندازه قطعات DNA برش خورده با آنزیم‌های محدودکننده یا سایر قطعات DNA مهندسی شده استفاده می‌شود.

• تأیید صحت کلونینگ: پس از وارد کردن یک قطعه DNA به یک وکتور، از الکتروفورز و این مارکر برای تأیید اندازه اینسرت (insert) استفاده می‌شود.

• آنالیز DNA ژنومی: در برخی موارد، از این مارکر برای تخمین اندازه قطعات DNA ژنومی هضم شده با آنزیم‌های محدودکننده استفاده می‌شود.

نحوه استفاده از لدر DNA 100 bp پارس توس:

1. آماده‌سازی ژل آگارز: ژل آگارز را با غلظت مناسب برای محدوده اندازه DNA مورد انتظار خود تهیه کنید.

2. بارگذاری مارکر: مقدار توصیه شده از لدر DNA 100 bp پارس توس (که از قبل با بافر لودینگ مخلوط شده است) را مستقیماً در یکی از چاهک‌های ژل آگارز بارگذاری کنید. معمولاً 5 تا 10 میکرولیتر از مارکر برای یک ژل با اندازه متوسط کافی است.

3. بارگذاری نمونه‌ها: نمونه‌های DNA خود را که با بافر لودینگ مخلوط کرده‌اید، در چاهک‌های دیگر ژل بارگذاری کنید.

4. اجرای الکتروفورز: الکتروفورز را تحت ولتاژ مناسب تا زمان جداسازی کافی قطعات DNA انجام دهید.

5. رنگ‌آمیزی ژل: پس از اتمام الکتروفورز، ژل را با رنگ مناسب DNA (مانند اتیدیوم بروماید یا DNA Green Viewer) طبق پروتکل مربوطه رنگ‌آمیزی کنید.

6. مشاهده و تعیین اندازه: ژل را تحت نور UV (برای رنگ‌های فلورسنت) مشاهده کنید. باندهای لدر DNA با اندازه‌های مشخص به عنوان مرجع برای تخمین اندازه باندهای DNA نمونه شما استفاده می‌شوند. با مقایسه موقعیت باندهای نمونه با باندهای مارکر، می‌توانید طول تقریبی قطعات DNA نمونه را تعیین کنید. باندهای برجسته 500 bp و 1000 bp به عنوان نقاط مرجع کلیدی عمل می‌کنند.

نتیجه‌گیری:

لدر DNA 100 bp پارس توس یک ابزار ضروری و کارآمد برای تعیین دقیق اندازه قطعات DNA در الکتروفورز ژل آگارز است. آماده بودن برای مصرف، وجود باندهای برجسته و سازگاری با رنگ‌های متداول، استفاده از آن را آسان و نتایج را قابل اعتماد می‌سازد. این مارکر به محققان در تأیید اندازه محصولات PCR و قطعات DNA مهندسی شده کمک شایانی می‌کند و نقش مهمی در آنالیزهای روتین DNA در آزمایشگاه‌های بیولوژی مولکولی ایفا می‌کند. به یاد داشته باشید که برای حفظ کیفیت، این محصول باید در دمای -20 درجه سانتیگراد نگهداری شود.