کیت سنتز cDNA سوپرا

کیت سنتز cDNA سوپرا پارس توس (Easy cDNA Supra-TM Synthesis Kit): بهینه‌سازی رونویسی معکوس برای کارایی و دقت بالا

سنتز DNA مکمل (cDNA) از الگوهای RNA یک گام اساسی و ضروری در بسیاری از حوزه‌های تحقیقاتی بیولوژی مولکولی و کاربردهای بالینی است. این فرآیند، که رونویسی معکوس (Reverse Transcription) نامیده می‌شود، پیش‌نیاز تکنیک‌هایی مانند Real-Time PCR (RT-qPCR) برای اندازه‌گیری بیان ژن، ساخت کتابخانه‌های cDNA برای کلونینگ یا تعیین توالی RNA (RNA-Seq) و سایر آنالیزهای پایین‌دستی است. "کیت سنتز cDNA سوپرا پارس توس" (Easy cDNA Supra-TM Synthesis Kit) یک راه حل جامع و پیشرفته است که تمامی اجزای لازم برای تبدیل کارآمد RNA کل (Total RNA) یا mRNA به cDNA تک‌رشته‌ای را فراهم می‌آورد و برای اطمینان از کیفیت و بازده بالا در سنتز cDNA بهینه شده است.

ترکیبات و فرمولاسیون منحصر به فرد کیت Easy cDNA Supra-TM Synthesis Kit

این کیت با فرمولاسیون هوشمندانه و اجزای با کیفیت بالا، فرآیند سنتز cDNA را ساده، سریع و بسیار کارآمد می‌سازد. اجزای اصلی کیت به دو بخش 2X RT Buffer Mix و Enzyme Mix تقسیم می‌شوند:

1. 2X RT Buffer Mix (مخلوط بافر رونویسی معکوس 2 برابر غلیظ): این مخلوط آماده مصرف شامل تمام مواد واکنش ضروری برای سنتز cDNA است: * 2X RT Buffer: بافر بهینه شده برای فعالیت آنزیم ریورس ترنسکریپتاز، که محیط شیمیایی مناسبی را برای انجام واکنش فراهم می‌کند. * dNTP Mix (1mM): شامل چهار نوع دئوکسی‌نوکلئوتید تری‌فسفات (dATP, dCTP, dGTP, dTTP) با غلظت نهایی 1 میلی‌مولار از هر کدام در این بافر 2X. این غلظت متوازن، بلوک‌های ساختمانی DNA را به میزان کافی برای سنتز کارآمد فراهم می‌آورد. * MgCl2​ (8mM): یون منیزیم (Mg2+) یک کوفاکتور ضروری برای فعالیت آنزیم ریورس ترنسکریپتاز است. غلظت نهایی 8 میلی‌مولار در این بافر 2X به طور عمومی برای اکثر واکنش‌ها بهینه شده است. * Oligo d(T)16: پرایمر الیگو(dT) متشکل از 16 نوکلئوتید تیمین، که به طور اختصاصی به دنباله Poly(A) در انتهای 3' مولکول‌های mRNA متصل می‌شود. این پرایمر برای سنتز cDNA از mRNAهای یوکاریوتی استفاده می‌شود. * Random Hexamer: پرایمرهای تصادفی شش‌نوکلئوتیدی که به طور غیرانتخابی به مناطق مختلف در کل مولکول‌های RNA (شامل mRNA، rRNA، tRNA و RNAهای غیرکدکننده) متصل می‌شوند. استفاده از این پرایمرها برای رونویسی از تمام RNA موجود در نمونه و همچنین RNAهای فاقد دنباله Poly(A) مفید است. * Stabilizer (تثبیت‌کننده): افزودنی‌هایی برای حفظ پایداری و عملکرد اجزای بافر در طول نگهداری.

2. Enzyme Mix (مخلوط آنزیمی): این بخش شامل آنزیم‌های اصلی و محافظتی است: * Supra Thermostable H-minus MMLV (آنزیم MMLV سوپرا مقاوم به حرارت با فعالیت H-minus): این آنزیم ریورس ترنسکریپتاز پیشرفته، نقطه قوت اصلی این کیت است. همانند توضیح محصول مربوطه، این آنزیم به طور ژنتیکی اصلاح شده تا فاقد فعالیت RNase H باشد (برای جلوگیری از تخریب RNA الگو و افزایش بازده cDNA طول کامل) و دارای مقاومت به حرارت بالا با فعالیت بهینه در دمای 50 درجه سانتی‌گراد است. این ویژگی به آن اجازه می‌دهد تا ساختارهای ثانویه پیچیده RNA را ذوب کرده و رونویسی کارآمد را از الگوهای چالش‌برانگیز فراهم آورد. * RNase Inhibitor (مهارکننده RNase): برای محافظت از RNA الگو و cDNA تازه سنتز شده در برابر تخریب توسط آنزیم‌های RNase که ممکن است در نمونه یا محیط آزمایش وجود داشته باشند. * Stabilizer (تثبیت‌کننده): برای حفظ پایداری آنزیم‌ها.

3. DEPC-treated water (آب دی‌اتیل‌پیروکربنات تیمار شده): آب استریل و عاری از RNase است که برای رقیق کردن نمونه‌ها یا تنظیم حجم نهایی واکنش استفاده می‌شود.

4. cDNA Control Primer (B2M) (Beta-2-Microglobulin) (Human, Mouse, Rat) (پرایمر کنترل cDNA): پرایمرهای کنترل برای ژن بتا-2-میکروگلوبولین (B2M) در انسان، موش و رت فراهم شده‌اند. این پرایمرها به منظور تأیید موفقیت‌آمیز سنتز cDNA از طریق انجام یک PCR معمولی (Endpoint PCR) از cDNA سنتز شده، استفاده می‌شوند.

ویژگی‌ها و مزایای برجسته کیت Easy cDNA Supra-TM Synthesis Kit:

1. پروتکل آسان و حداقل مراحل پیپتینگ: طراحی این کیت به گونه‌ای است که با ادغام dNTPs، MgCl2​، و هر دو پرایمر Oligo d(T) و Random Hexamer در یک بافر 2X آماده مصرف، نیاز به پیپت کردن جداگانه این اجزا را به حداقل می‌رساند. این امر به طور چشمگیری زمان آماده‌سازی واکنش را کاهش داده و "خطای تکنیکی کاربر" را کاهش می‌دهد.

2. آنزیم MMLV فاقد فعالیت RNase H (Supra Thermostable H-minus MMLV): این ویژگی حیاتی از تخریب RNA الگو در طول سنتز cDNA جلوگیری می‌کند. نتیجه این امر، "سنتز cDNA بلند" و با طول کامل است، که برای آنالیزهای دقیق پایین‌دستی ضروری است.

3. انجام واکنش در دمای بالا برای بی ثبات کردن ساختارهای ثانویه RNA: فعالیت بهینه آنزیم در دمای 50 درجه سانتی‌گراد، امکان رونویسی معکوس در دمایی را فراهم می‌کند که بسیاری از ساختارهای ثانویه پیچیده RNA (که می‌توانند مانع فعالیت آنزیم در دماهای پایین‌تر شوند) ناپایدار و ذوب می‌شوند. این مزیت به ویژه برای RNAهای با محتوای GC بالا یا الگوهای ساختار یافته بسیار مفید است.

4. افزایش کارایی کیت: ترکیب هوشمندانه اجزا و استفاده از آنزیم بهینه شده، منجر به افزایش کلی کارایی و بازده سنتز cDNA می‌شود.

5. جامعیت پرایمرها: استفاده همزمان از هر دو پرایمر Oligo d(T) و Random Hexamer در بافر کیت، انعطاف‌پذیری بالایی را در سنتز cDNA از انواع RNAها (چه mRNA و چه Total RNA) فراهم می‌کند و تضمین می‌کند که تمامی رونویسی‌ها (transcriptomes) به خوبی پوشش داده شوند.

بسته‌بندی و نگهداری:

این کیت در بسته‌بندی 50 تستی عرضه می‌شود که برای انجام 50 واکنش سنتز cDNA کافی است. برای حفظ پایداری و فعالیت بهینه آنزیم‌ها و реагенت‌ها، این محصول باید در فریزر 20- درجه سانتی‌گراد نگهداری شود.

نکات مهم:

• همیشه از RNA با کیفیت بالا و عاری از RNase استفاده کنید.

• برای جلوگیری از آلودگی RNase، از ابزارها و تکنیک‌های استریل استفاده کنید.

• اگرچه کیت شامل پرایمرهای عمومی است، در برخی موارد برای اهداف خاص ممکن است نیاز به استفاده از پرایمرهای اختصاصی برای رونویسی معکوس باشد.

نتیجه‌گیری:

کیت سنتز cDNA سوپرا پارس توس (Easy cDNA Supra-TM Synthesis Kit) یک راه حل یکپارچه، پیشرفته و کارآمد برای سنتز cDNA با کیفیت بالا است. با بهره‌گیری از آنزیم MMLV مقاوم به حرارت و فاقد فعالیت RNase H، پروتکل ساده شده و فرمولاسیون جامع، این کیت سنتز cDNA را از الگوهای RNA مختلف (از جمله RNAهای چالش‌برانگیز با ساختار ثانویه) با بازده و دقت عالی تضمین می‌کند. این محصول به محققان کمک می‌کند تا با اطمینان و سهولت بیشتری به نتایج دقیق در آزمایش‌های Real-Time PCR، کلونینگ و سایر آنالیزهای پایین‌دستی دست یابند، و آن را به ابزاری ضروری در هر آزمایشگاه بیولوژی مولکولی تبدیل می‌کند.