مستر میکس 2X ریل تایم سایبرگرین

مستر میکس 2X ریل تایم سایبرگرین پارس توس: راهنمای جامع برای آنالیز کمی DNA و cDNA به روش Real-Time PCR

مستر میکس 2X ریل تایم سایبرگرین تولیدی شرکت پارس توس، یک محلول آماده به مصرف و بهینه شده است که به طور اختصاصی برای انجام آنالیز کمی Real-Time PCR (Polymerase Chain Reaction) بر روی نمونه‌های DNA و cDNA طراحی و تولید شده است. این محصول با بهره‌گیری از اجزای با کیفیت و فرمولاسیون دقیق، یک راهکار کارآمد و حساس برای محققان و متخصصان در زمینه‌های مختلف از جمله تشخیص پزشکی، تحقیقات ژنتیکی، و علوم زیستی فراهم می‌آورد.

سایبرگرین پارس توس

مبانی عملکرد مستر میکس سایبرگرین در Real-Time PCR

Real-Time PCR یک تکنیک قدرتمند برای تکثیر و اندازه‌گیری همزمان میزان DNA در طول واکنش PCR است. مستر میکس سایبرگرین پارس توس با استفاده از دو جزء کلیدی این فرآیند را تسهیل می‌کند:

1. SYBR Green I: این ماده یک فلوروفور سیانین است که به DNA دورشته‌ای (dsDNA) متصل شده و آن را رنگ‌آمیزی می‌کند. ویژگی منحصر به فرد SYBR Green I در این است که پس از اتصال به dsDNA، شدت فلورسانس آن به طور چشمگیری افزایش می‌یابد. در هر چرخه تکثیر DNA، میزان dsDNA افزایش یافته و به تبع آن، سیگنال فلورسانس نیز قوی‌تر می‌شود. اندازه‌گیری این شدت فلورسانس در پایان هر چرخه، امکان کمی‌سازی دقیق میزان DNA اولیه در نمونه را فراهم می‌سازد. لازم به ذکر است که SYBR Green I قابلیت اتصال و رنگ‌آمیزی DNA تک‌رشته‌ای (ssDNA) و RNA را نیز دارد، اما با کارایی به مراتب کمتر نسبت به dsDNA.

2. Chemical Hot-start Taq Polymerase: این آنزیم DNA پلیمراز، که با روش Hot-Start فعال می‌شود، نقش کلیدی در تکثیر اختصاصی قطعه DNA هدف ایفا می‌کند. تکنولوژی Hot-Start به این صورت عمل می‌کند که فعالیت آنزیم تا رسیدن به دمای بالا (معمولاً 95 درجه سانتی‌گراد در مرحله دناتوراسیون اولیه) مهار می‌شود. این امر از فعال شدن غیر اختصاصی آنزیم در دماهای پایین‌تر و در نتیجه تشکیل محصولات جانبی ناخواسته مانند پرایمر دایمر (Primer-dimer) جلوگیری می‌کند. پرایمر دایمرها ساختارهای DNA دورشته‌ای کوچکی هستند که از اتصال پرایمرها به یکدیگر ایجاد می‌شوند و می‌توانند در نتایج کمی‌سازی تداخل ایجاد کنند. وجود Chemical Hot-start Taq در مستر میکس پارس توس، به میزان قابل توجهی از تشکیل پرایمر دایمر جلوگیری کرده و تکثیر اختصاصی و دقیق قطعه DNA هدف را تضمین می‌نماید.

3. Pre-optimized Buffer: این محلول بافر بهینه شده، شرایط شیمیایی مناسب برای انجام واکنش PCR را فراهم می‌کند. این بافر شامل غلظت مناسبی از یون‌های منیزیم، نوکلئوتیدها (dNTPs)، و سایر اجزای ضروری برای فعالیت آنزیم DNA پلیمراز و اتصال پرایمرها به DNA الگو می‌باشد. بهینه بودن بافر، کارایی و دقت واکنش PCR را به حداکثر می‌رساند.

قیمت مستر میکس ریل تایم

مزایای استفاده از مستر میکس 2X ریل تایم سایبرگرین پارس توس

• کاربری آسان: این مستر میکس به صورت یک محلول آماده ارائه می‌شود که نیاز به افزودن جداگانه بسیاری از اجزا را از بین می‌برد و مراحل آماده‌سازی واکنش PCR را ساده و سریع می‌سازد.

• حساسیت بالا: فرمولاسیون بهینه شده و استفاده از آنزیم Hot-Start با کیفیت، منجر به افزایش حساسیت واکنش و امکان تشخیص مقادیر بسیار کم DNA اولیه می‌گردد.

• تکثیر اختصاصی: وجود تکنولوژی Chemical Hot-start به طور موثری از تشکیل پرایمر دایمر جلوگیری کرده و تکثیر اختصاصی قطعه DNA هدف را تضمین می‌کند، که این امر منجر به نتایج دقیق‌تر و قابل اعتمادتر می‌شود.

• سازگاری با تمامی دستگاه‌های Real-Time PCR: این محصول با داشتن یک ویال جداگانه رنگ ROX 50X، امکان سازگاری با تمامی دستگاه‌های Real-Time PCR موجود در بازار را فراهم می‌سازد. رنگ ROX به عنوان یک رنگ مرجع غیرفعال (Passive Reference Dye) در برخی از دستگاه‌ها برای نرمال‌سازی سیگنال فلورسانس و کاهش اثرات ناشی از تغییرات حجم واکنش یا نوسانات نوری دستگاه استفاده می‌شود. ارائه جداگانه این رنگ، انعطاف‌پذیری بالایی را برای کاربران فراهم می‌کند تا بر اساس نوع دستگاه خود، مقدار مناسبی از آن را به واکنش اضافه نمایند.

• قیمت مناسب: شرکت پارس توس به عنوان یک تولیدکننده داخلی، این محصول را با کیفیت بالا و قیمت رقابتی عرضه می‌کند که می‌تواند هزینه‌های تحقیقاتی را به میزان قابل توجهی کاهش دهد.

• بسته‌بندی متنوع: این محصول در دو نوع بسته‌بندی 1 میلی‌لیتر و 5 عدد ویال 1 میلی‌لیتر (مجموعاً 5 میلی‌لیتر) ارائه می‌شود. بسته‌بندی 5 میلی‌لیتری با قیمت مناسب‌تری عرضه می‌گردد و برای کاربردهای با حجم بالا، یک گزینه اقتصادی محسوب می‌شود. هر دو نوع بسته‌بندی شامل ویال جداگانه رنگ ROX نیز می‌باشند.

• استفاده از Chemical Hot Start تولید پارس توس: این امر نشان‌دهنده کیفیت و کنترل بالای تولید در شرکت پارس توس است و تضمین‌کننده عملکرد بهینه آنزیم می‌باشد.

رنگ سایبرگرین

اجزای کیت مستر میکس 2X ریل تایم سایبرگرین پارس توس

هر بسته از این محصول شامل دو جزء اصلی است:

• (2x) SYBR Green Master Mix: این ویال حاوی غلظت دو برابری از تمامی اجزای ضروری برای واکنش Real-Time PCR به جز پرایمرها و DNA الگو می‌باشد. این اجزا شامل آنزیم Chemical Hot-start Taq Polymerase، SYBR Green I dye، بافر بهینه شده، dNTPs و یون‌های منیزیم با غلظت مناسب است.

• 50x Rox Dye: یک ویال جداگانه حاوی محلول غلیظ (50 برابر) رنگ ROX است. کاربر می‌تواند بر اساس نوع دستگاه Real-Time PCR مورد استفاده، مقدار مناسبی از این رنگ را به واکنش اضافه نماید (توصیه شرکت پارس توس استفاده از 0.4 میکرولیتر از این محلول 50X در هر واکنش نهایی 20 میکرولیتری است).

Sybr green

دستورالعمل استفاده (به طور کلی)

اگرچه دستورالعمل دقیق استفاده ممکن است بسته به پروتکل خاص و دستگاه مورد استفاده متفاوت باشد، مراحل کلی انجام واکنش Real-Time PCR با استفاده از مستر میکس سایبرگرین پارس توس به شرح زیر است:

1. تهیه واکنش: در یک لوله PCR استریل، اجزای زیر را با هم مخلوط کنید:

   • مستر میکس 2X سایبرگرین پارس توس

   • پرایمرهای اختصاصی (Forward و Reverse) با غلظت مناسب

   • DNA یا cDNA الگو

   • رنگ ROX 50X (در صورت نیاز و بر اساس نوع دستگاه)

   • آب مقطر فاقد RNase/DNase برای رساندن حجم نهایی واکنش به مقدار مورد نظر.

2. برنامه‌ریزی دستگاه Real-Time PCR: پروتکل PCR مناسب برای قطعه DNA هدف خود را در دستگاه تنظیم کنید. این پروتکل معمولاً شامل مراحل دناتوراسیون اولیه، چرخه‌های تکراری دناتوراسیون، آنیلینگ و اکستنشن، و در نهایت مرحله ذوب (Melting Curve Analysis) برای تأیید اختصاصی بودن محصول تکثیر شده می‌باشد.

3. اجرای برنامه PCR: لوله‌های حاوی واکنش را در دستگاه Real-Time PCR قرار داده و برنامه را اجرا کنید. دستگاه در طول اجرای برنامه، میزان فلورسانس را در هر چرخه اندازه‌گیری خواهد کرد.

4. آنالیز داده‌ها: پس از اتمام برنامه، داده‌های فلورسانس جمع‌آوری شده توسط دستگاه را با استفاده از نرم‌افزار مربوطه آنالیز کنید تا منحنی‌های تکثیر، مقدار کمی DNA اولیه و منحنی ذوب را به دست آورید.

نتیجه‌گیری

مستر میکس 2X ریل تایم سایبرگرین پارس توس با ارائه یک فرمولاسیون بهینه شده، آنزیم Hot-Start با کیفیت و رنگ ROX جداگانه، یک راهکار قدرتمند، حساس و مقرون به صرفه برای انجام آنالیز کمی Real-Time PCR به شمار می‌رود. سهولت استفاده، تکثیر اختصاصی و سازگاری با انواع دستگاه‌های Real-Time PCR، این محصول را به یک انتخاب ایده‌آل برای محققان و متخصصان در زمینه‌های مختلف علوم زیستی و تشخیص پزشکی تبدیل کرده است. بسته‌بندی متنوع و قیمت مناسب نیز از دیگر مزایای قابل توجه این محصول تولیدی شرکت پارس توس می‌باشد.